DAPI染色原理及使用说明

DAPI 是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处，一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍，常用与荧光显微镜观测，根据荧光的强度可以确定DNA的量。另外，因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。单独DAPI的最大吸收波长为340nm，最大发射波长为488nm；当DAPI与双链DNA结合时，最大吸收波长为364nm，最大发射波长为454nm（10 mM Tris pH7.0，100 mM NaCl，10 mM EDTA），其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5，其发散光的波长范围约在500nm左右。

使用说明（仅供参考）

1. 配制工作液：用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作的浓度（0.5-10 μg/mL），工作液可于4 ℃保存6个月。

2. 固定的细胞或组织染色：对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行DAPI 染色。

a）对于贴壁细胞或组织切片：加入适量DAPI染色液，覆盖住样品即可。

对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。 

b）吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

c）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm，发射波长460 nm。

3. 活细胞或组织染色：

a）细胞培养物中加入适量DAPI染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。 

b）在 37 ℃培养细胞 10～20 分钟。

c）用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm，发射波长460 nm。