测定意义：
Glu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20 种氨基酸之一，
而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu 还是
味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生物试剂。

测定原理：
利用提取液提取，然后用显色剂进行显色，显色后在570nm 下进行测定。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、
蒸馏水。

试剂的组成和配制：
试剂一：液体120mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶， 4℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水充分溶解混匀，用不完的试剂仍 4℃
保存。

谷氨酸提取：
1、细菌或培养细胞样品：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞
数量（104 个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL
试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30
次）；8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组
织，加入1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）或细胞培养液样品：按照血清（浆）或细胞培养液体积（mL）：试剂一体积
(mL)为1：5~10 的比例（建议取0.1mL 血清（浆）或者细胞培养液加入1mL 试剂一），进
行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。
2、 在有盖EP 管中加入下列试剂：

试剂名称（μL） 测定管 对照管
样本 250
试剂一 250
试剂二 50 50
混匀，90℃水浴20min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却，取200uL 至微量石英比色皿
或96 孔板中，于570nm 波长处记录吸光值A。△A=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一
管。

注意事项：
为提高检测灵敏度，测定管的吸光值应小于1，若大于1 则需要将上清液用试剂一稀释至适
当倍数后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。