使用目的: 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗鼠抗体(HAMA)表达。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抗鼠抗体(HAMA)表达。用纯化的人抗鼠抗体(HAMA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中抗鼠抗体(HAMA)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP 标记的抗鼠抗体(HAMA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),与CUTOFF 值相比较,从而判定标本中人抗鼠抗体(HAMA)的存在与否。 操作步骤 1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀, 3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。 8. 洗涤:操作同5。 9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。 |