游离脂肪酸（free fattyacid，FFA）含量测定试剂盒说明书
测定意义：
FFA既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌 功
能有关，也可反映食物贮藏中的品质变化。
测定原理：
在弱酸性条件下，FFA 与铜盐反应生成铜皂，在 715nm 处有特征吸收峰，在一定范围内游
离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。
自备仪器和用品： 研钵、台式离心机、可见分光光度
计、1mL 玻璃比色皿。 试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。
样品中 FFA 提取：
1、 血液：将所取血液，室温静置1 h 后，于4 ℃ 离心机 3500 rpm离心 15min，取上清0.1mL，
加 1.2mL 试剂一，震荡提取 3h，8000rpm，4℃离心 10min，取上清液待测。
2、 组织：组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后称取约 0.1g 转移至离
心管，按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：12 的比例加入试剂一，震荡提取 3h，
8000rpm，4℃离心 10min，取上清液待测。
3、 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1.2 的比例（建
议 500 万细胞加入 1.2mL 试剂一）加入试剂一，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超
声 2 秒，间隔 3 秒，总时间 3min）；震荡提取3h，然后 8000rpm，4℃，离心 10min，取
上清待测。
测定操作：
1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 715 nm。
2. 对照管：取上清液 1mL，加 0.5mL 试剂二，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层 0.8mL
于 1mL 玻璃比色皿，调零。
3. 测定管：取上清液 1mL，加 0.5mL 试剂三，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层 0.8mL
于 1mL 玻璃比色皿，测定吸光值，记为 A。
记为 A 测定管。
FFA 含量计算：
标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R 2 =0.994
1. 血液中 FFA含量计算
FFA（μmol/L）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷V 样=1333×(A-0.0055)
2. 组织中 FFA含量计算
（1）按样本蛋白浓度计算
FFA（μmol/mg prot）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样×Cpr)= 0.133×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按样本质量计算
FFA（μmol/g）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 0.16×(A-0.0055)÷W
3. 按细胞数量计算
FFA（μmol/10 4 cell）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)
= 0.16×(A-0.0055)÷细胞数量
V 样总：上清液总体积，1.2 mL；V 反总：反应总体积，1mL；V 样：加入样本体积，1mL；
W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL