犬松弛素（RLN-6B6）质控品

犬松弛素（RLN-6B6）质控品目前对松弛素基因的研究主要集中在人、小鼠、猪等物种上,国外已克隆了犬前松弛素原(preprorelaxin)的基因序列,鉴于此,本研究以犬胎盘、卵巢组织为材料,应用RT-PCR技术获得多条犬前松弛素原基因cDNA,进行克隆并作生物信息学分析,同时构建犬松弛素原(prorelaxin)原核表达载体,转化入大肠杆菌中,使其表达相应蛋白质。再将表达的重组蛋白免疫新西兰兔以制备多克隆抗体。上述方法大程度的推动了松弛素的结构和功能的研究。本研究具体如下：1、犬前松弛素原基因的克隆和生物信息学分析本研究以北京犬和吉娃娃新生胎盘、贵宾犬卵巢为材料,采用RT-PCR技术扩增前松弛素原基因,结果显示：本实验完整克隆了从所获样品中扩增到的预期大小目的片段,包含一个534bp的开放阅读框,编码177个氨基酸。将所扩增片段进行序列分析显示,与NCBI核酸数据库检索的犬preprorelaxin的cDNA序列同源性为99.6%,均有3个核苷酸位点发生改变,从而引起相应氨基酸改变,但并未引起蛋白结构的变化。进化树分析结果显示,所获三条目的片段同为一支,与猫preprorelaxin基因的进化距离近。生物信息分析显示,3条序列等电点、带电荷数、氨基酸、消光系数、半衰期、不稳定系数一致,分子式分子量、不稳定系数、脂肪系数、总平均疏水指数有细微差异；跨膜区、信号肽、糖基化位点分析结果一致：二级结构组成一致,包含α-螺旋、延伸链、无规则卷曲,比例存在细微差异。

犬松弛素（RLN-6B6）质控品

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